-
RNA를 추출할 때 사용되어지는 각 시약의 역할과 원리에 대해서 알아봅니다.
RNA 추출원리는 세포, 조직 및 액체시료에서도 동일하게 작용을 하며 각 단계가 어떻게 작용이 확인합니다.
Trizol을 이용한 RNA 추출 과정
RNA 추출의 전체적인 요약
Trizol의 많은 성분 중에서 퀴니딘 이소티오시아네이트 (quinidine isothiocyanate)는 강력한 RNase 억제제이며
페놀은 세포 내 단백질과 지질을 분해합니다.
파쇄된 혼합물에 클로로포름 (Chloroform)을 첨가하면 수층과 유기층으로 분리되고,
이소프로필알코올 (isopropanol)로 침전시켜 수층에 존재하는 RNA를 분리합니다.
침전된 RNA는 TE 완충액이나 RNase가 없는 물에 용해하여 얻을 수 있으며
추출 과정에서 시약에 의해 RNA가 변성되는 것을 방지하여 RNA 회수율과 순도가 높습니다.
"RNA 추출 Protocol 바로가기" RNA 추출 Protocol 및 원리
RNA의 정의 RNA는 DNA (디옥시리보핵산)와 함께 유전정보를 전달하고 생물체 내에서 단백질 합성에 관여하는 분자입니다. RNA는 DNA와는 달리 여러 사본이 생성됩니다. 생성된 사본들은 메신저 RNA (mR
merry.more-merrier.co.kr
Trizol의 기능
Trizol은 acid phenol의 기능을 하는 RNA를 추출하는 과정에 사용되는 시약입니다.
이 시약은 세포나 조직 내의 RNA를 안정화하고 분리하기 위한 것으로 개발되었고 RNA를 안정화하는 역할을 합니다.
이는 단백질을 변성시키고 지질을 녹여서 세포막을 깨고 RNA와 DNA를 분리합니다.산성이 강해서 DNA가 변성되지만 acidic pH에서 RNA는 파괴되지 않으며 RNA 분해효소를 비활성화하여 RNA를 외부적
인 요소에 의한 영향을 방지합니다. 이후의 RNA 분석 및 실험에 안정적인 RNA를 공급합니다.
Chloroform의 기능
Chloroform 시약은 Trizol과 시료를 혼합하여 사용됩니다.강한 극성으로 물보다 Trizol에 잘 녹으며 수용액 층에 잔존하는 Trizol을 제거해 주는 역할을 합니다.
Chloroform은 지방을 용해해 주고 DNA를 아래로 분리하게 시킵니다.이러한 과정을 통해 RNA는 상단의 투명한 수용액 층에 존재하게 되고 지방과 DNA는 하단 층으로 분리됩니다.
Chloroform은 RNA를 고르게 분리하고 부유 된 불순물을 제거함으로써 추출된 RNA의 순도를 높입니다.
Isopropanol의 기능
Isopropanol은 Chloroform 처리 후 상단 투명 상층액에 포함된 RNA를 침전시키는 데에 주로 사용합니다.Chloroform 처리 후 상단 수용액에 존재하는 RNA를 효과적으로 침전시켜 알코올과 함께 침전물을 생성합니다.
이 과정에서 Isopropanol은 RNA와 함께 수용액에 존재하는 다양한 불순물을 제거하여 RNA의 순도를 높이는 역할을 합니다.또한, Isopropanol은 RNA를 침전시킴으로써 RNA를 빠르고 효율적으로 분리하고 수집할 수 있도록 도와줍니다.
Ethanol의 기능
Alcohol은 휘발성과 용해도가 높아서 RNA Pellet의 순도를 높여주는 역할을 합니다.침전된 RNA는 그대로 두고 잔존 Salt만을 녹여서 제거합니다.
또한 휘발성이 낮은 Isopropanol을 완전히 제거하며, 자연건조로 남은 용매를 쉽게 제거할 수 있습니다.
