RNA 추출 Protocol 및 원리

 

RNA의 정의

 

RNA는 DNA (디옥시리보핵산)와 함께 유전정보를 전달하고 생물체 내에서 단백질 합성에 관여하는 분자입니다.

 

 

RNA는 DNA와는 달리 여러 사본이 생성됩니다. 생성된 사본들은 메신저 RNA (mRNA), 전사 RNA (tRNA), 리보솜 RNA (rRNA) 등으로 분류됩니다. 

 

mRNA는 DNA에서 유전정보를 전달받아 단백질 합성에 사용되는 RNA이며, tRNA는 mRNA가 지시하는 아미노산을 가져다가 단백질 합성에 사용됩니다. rRNA는 단백질과 결합하여 리보솜을 형성하여 단백질 합성에 참여합니다. 

 

또한, RNA는 조절적 기능을 담당하기도 합니다. 이러한 다양한 역할로 인해 RNA는 생물체 내에서 중요한 역할을 수행하며, 생명의 다양한 측면에 관여합니다.

 

 

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RNA 추출의 원리

 

mRNA 추출은 전사 작용으로 mRNA를 독립적으로 분리하는 과정입니다.

 

 

일반적으로 세포 내에서 total RNA를 얻기위해 세포막을 녹이고, 역전사 작용방지를 위해 불안정한 RNA를 안정화시킵니다.

 

모든 종류의 RNA가 섞여있는 용액에서 mRAN만 중점적으로 가려내기 위해서 mRNA에만 존재하는 비-폴리(A)태일을 이용합니다. 

 

이런 절차를 통해 mRNA는 다른 RNA 유형과 분리되어 분석이나 조작에 사용될 수 있습니다.

 

mRNA 추출

 

 

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mRNA 추출 Protocol

 

1. 1ml Trizol로 세포막을 용해합니다.
2. 용해된 세포를 1.5ml tube에 모아줍니다.
3. Chloroform 200ul를 용해액에 추가한 후 vortexing를 이용하여 잘 섞어줍니다.
4. 원심분리 (13,200g, 20min, 4℃ )
5. 새 1.5ml tube로 투명 상층액 200µl를 옮겨줍니다.
6. 투명 상층액과 동일양의 이소프로판올 (Iso Propanol)을 첨가한 후 섞어줍니다.
    → Overnight 반응할 경우 생성되는 pellet 많을 수 있지만 단시간 반응도 괜찮음
7. 원심분리 (13,200g, 10min, 4℃ )
8. 액체를 제거해 줌 (이소프로판올 제거)
9. 1.5ml tube 아래에 가라앉은 pellet 덩어리 (mRNA) 확인 후 1ml 70% Ethanol 첨가합니다.
10. 원심분리 (13,200g, 10min, 4℃ )
11. 1ml 70% Ethanol 첨가합니다.
12. 원심분리 (13,200g, 10min, 4℃ )
13. Ethanol을 제거한 다음 가라앉은 mRNA가 투명해질 정도까지 말려줍니다.
14. Ultrapure water 20ul를 추가 후 mRNA를 잘 녹여줍니다.
15. mRNA 용해액에 포함된 농도를 Nanodrop으로 확인해줍니다.