[Flow cytometry] 세포주기 (Cell cycle) Gating 및 분석

 

 

Flow cytometry 를 이용하여 세포주기 (Cell cycle) Gating 및 분석 방법에 대해서 알아봅니다.

 

 

 

세포주기 (Cell cycle)

 

세포들은 모두 일정 세포주기를 가지고 있습니다. 

 

세포주기의 단계는 크게 Interphase 단계, Metaphase 단계로 나뉘며 Interphase 단계는 

 

G0/G1기 ~ G2기, Metaphase 단계 → Prophase ~ Mitosis의 세포 주기를 가집니다.

세포주기가 1) 어느 단계에 머물러 있는지 혹은 2) 세포주기 정지가 되었는지, 3) 세포 사멸이 되었는지 등의 현상

 

은 Nucleic acid 염색 후 Flow cytometry (FACS) 분석을 통해서 확인할 수 있습니다.

 

 

 

 

세포주기 (Cell cycle) 분석 샘플

 

세포주기를 확인하기 위해서 DNA 염색이 필요합니다. 

 

 

DNA 염색을 하기 위해서 PI (Propidium iodide), 7-AAD 시약 혹은 DAPI 등을 이용하여 진행하게 됩니다.

 

세포주기 측정 원리 및 샘플 제작 방법은 아래 이전 포스팅을 참고하시기를 추천해 드립니다.

 

 

[Flow cytometry] 세포주기 (Cell cycle) Protocol

[Flow cytometry] 세포주기 (Cell cycle) Protocol

 

 

 

 

세포주기 (Cell cycle) Gating

 

 

세포주기 분석에 필요한 샘플 준비가 끝나면 Flow cytometry (FACS)기기를 통해서 세포주기 (Cell cycle)

 

 

Gating 후 분석을 진행합니다.

 

 

 

분석을 위해서는 두가지 스텝이 필요합니다.

 

• 1step: FSC와 SSC Gating

 

먼저 FSC와 SSC의 지표를 이용하여 Singlets 게이팅을 통해 doublets을 제외시켜 줍니다.

 

 

Singlets Gating

(참조) https://www.bio-rad-antibodies.com/

 

 

 

 

 

• 2step: Cell Cycle Gating

 

PI (Propidium iodide) 또는 7-AAD 시약을 사용할 경우 532nm excited 파장을 사용하시면 되고, 

 

 

DAPI를 사용하실 경우 UV, 405nm의 파장으로 detection 하시면 됩니다.

 

G1기, S기, G2/M기를 단계별로 세포주기의 분포 비율 확인이 가능합니다.

 

 

Cell Cycle gating

 

 

 

 

세포주기 (Cell cycle) 그래프 분석

 

G1기, S기, G2/M기를 단계별로 세포주기의 분포 비율 확인이 가능합니다.

 

세포주기 정지(Cell arrest)가 발생할 경우, 히스토그램의 G2/M기 peak은 증가하고 G0/G1 peak은 감소합니다.

 

세포증식이 과하게 활성화될 경우 S phase 가 상대적으로 높아지고, G1, G2/M peak는 

 

 

상대적으로 감소함을 확인할 수 있습니다.