Cell viability 측정 - WST-8 assay 원리 및 Protocol

WST-8 assay이란

WST-8은 미토콘드리아 기능을 평가하고 세포 생존 및 세포 독성을 연구하기 위해 일반적으로 사용되는 실험 방법 중 하나입니다. 주로 세포주나 조직에서 활성산소와 미토콘드리아 기능을 측정하는 데 사용됩니다. 

 

이 실험의 주요 목적은 샘플 내 세포의 생존 가능성을 결정하고 다양한 조건이나 처리가 미토콘드리아에 미치는 영향을 평가하는 것입니다.

 

또한, 약물이나 화합물의 독성을 확인하기 위해 테스트 샘플의 미토콘드리아 활성에 영향을 미치는지 여부를 연구합니다.이는 세포나 조직의 생물학적 반응이나 약물 효과를 이해하는 데 도움이 되며 질병의 발생과 치료에 대한 통찰력을 제공합니다.

 

 

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WST-8의 원리

WST-8은 테트라졸리움 계열(Tetrazolium)의 구성물질이며 살아있는 세포에서 미토콘드리아 탈수소효소 (dehydrogenase)에 의해 환원되어 오렌지색 포르마잔을 형성할 수 있습니다.

 

이 방법으로 생성된 포르마잔 (formazan)은 수용성이며 배양액에 쉽게 용해되기 때문에 별도의 다른 스텝없이 마이크로플레이트 리더기를 이용하여 쉽게 OD 값으로 결과를 확인할 수 있습니다.

 

WST Plus-8은 안정성이 높고 세포독성이 낮기 때문에 24~48시간 동안 세포에 처리가 가능하며 세포생존율, 증식, 세포독성 분석 목적으로 사용할 수 있습니다.

 

WST-8 assay의 원리와 구성요소

                                 출처:https://www.dojindo.com/ASIA/products/CK04/

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) Cell Proliferation / Cytotoxicity Assay Dojindo

 

 

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WST-8 assay Protocol

 

• 세포배양

실험 목적에 따라서 Cell plate에 적정 양의 세포를 seeding 하고 원하는 약물을 세포에 처리하여 반응시킵니다.

 

• WST-8처리

1. 미디어 용량에 10%의 비율로 WST-8 용액을 첨가합니다.
    예를 들어, 96well 기준 (200 μl): 20 μl첨가, 6well 기준(2ml): 200 μl첨가합니다.

 

2. 빛을 차광하여 1시간~1시간반 정도 37ºC 인큐베이터에서 반응합니다.

3. 반응이 끝난 후, 96well의 경우는 그대로 마이크로 플레이터 리더기 측정하고 그 외의 크기의 plate의 경우는 96well로 200 μl씩 반응된 미디어를 옮겨 흡광도 값을 측정합니다. (Wavelength 460nm)

 

 

• WST-8 정량

WST-8 assay 정량은 Control 대비 백분율(%)로 계산하시면 됩니다.

 

 

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WST-8와 MTT assay의 차이

 

• 세포독성 및 증식유무를 측정하는 원리는 동일하고 처리과정에 있어서 차이가 있습니다.

 

• MTT의 경우 세포독성 및 증식의 차이를 보기위해서 테트라졸륨염을 반응하여 보라색의 formazam을 형성한 뒤 유기용매로 녹여내는 작업이 필요합니다. 유기 용매를 처리 시 미디어의 제거 과정에서 세포의 손실 우려가 발생할 수 있고 2 step으로 진행이 됩니다. 

 

• WST는 수용성의 테트라졸륨염에 의해서 생성되는 formazan은 미디어에 미디어에 잘 녹아 별다른 처리과정없이 바로 흡광도를 측정할 수 있습니다. MTT보다 sensitivity가 매우 높습니다.

 

 

결론적으로, 두 에세이 모두 세포 생존율이나 세포 증식율을 측정하는 목적으로 사용할 수 있습니다.

 

다만 현미경으로 관찰하는 세포의 밀도나 생존율이 정량적 측정결과와 상이하게 나오는 경우 두 assay 모두 해보시길 추천드립니다.